以下是为您整理的博来霉素诱导肺纤维化动物模型（小鼠/大鼠）完整实验方案，重点突出检测项目，内容严格遵守学术规范，不包含任何企业信息：
博来霉素诱导肺纤维化模型建立与检测方案
一、模型建立
- 动物品系
- 小鼠：C57BL/6（常用，对纤维化敏感）
- 大鼠：SD或Wistar品系
- 造模方法
- 给药途径：气管内滴注（推荐）或鼻腔吸入
- 剂量范围：
- 小鼠：2.5-5 mg/kg 博来霉素（生理盐水溶解）
- 大鼠：5-7.5 mg/kg
- 对照组：等体积生理盐水
- 时间点设计
- 炎症期：造模后7-14天
- 纤维化期：造模后21-28天
二、核心检测项目
(一) 组织病理学分析（金标准）
- 肺组织切片染色
- 苏木素-伊红染色（H&E）：评估炎症细胞浸润、肺泡结构破坏程度。
- Masson三色染色：蓝色胶原纤维定量（关键指标）。
- 天狼星红染色（偏振光观察）：区分Ⅰ型（橙红色）和Ⅲ型胶原（绿色），定量纤维化面积。
- 病理评分系统
- Ashcroft评分：半定量评估纤维化程度（0-8分，基于肺泡壁增厚/纤维化病灶范围）。
(二) 胶原代谢定量检测
- 羟脯氨酸（Hyp）含量测定
- 原理：胶原特异性氨基酸，反映总胶原沉积量。
- 步骤：碱水解法处理肺组织 → 比色法/荧光法检测。
- 数据呈现：μg Hyp / mg 肺组织湿重。
(三) 炎症与纤维化标志物检测
- mRNA水平（qPCR）
- 蛋白水平
- Western Blot/免疫组化：检测α-SMA、TGF-β1、胶原蛋白表达与定位。
- ELISA：定量BALF（支气管肺泡灌洗液）或肺匀浆中TNF-α、IL-6、TGF-β1等因子浓度。
(四) 肺功能检测（可选，需专用设备）
- 无创全身体积描记法：监测呼吸频率、潮气量。
- 有创肺功能检测：气管插管连接呼吸机，测量肺顺应性（下降提示纤维化）。
(五) 微CT成像（高分辨率）
- 应用：活体动态观察肺密度增高区域（纤维化病灶）。
- 定量指标：肺组织密度（HU值）、纤维化区域体积占比。
三、辅助验证实验
- 免疫荧光染色
- 共标记：α-SMA⁺/Vimentin⁺ 细胞（肌成纤维细胞）在纤维化区域的浸润。
- 氧化应激指标
- MDA（丙二醛）含量、SOD（超氧化物歧化酶）活性测定（纤维化伴随氧化损伤）。
- 细胞凋亡检测
- TUNEL法观察肺泡上皮细胞凋亡情况。
四、方案设计注意事项
- 剂量优化：预实验确定品系特异性剂量（避免动物急性死亡）。
- 时间点对照：需设立多时间点（如7d、14d、21d、28d）以观察动态进程。
- 样本量：每组≥6只动物（兼顾统计学效力与伦理原则）。
- 伦理审批：实验前需获动物福利委员会批准。
五、数据解读要点
- 成功模型标准：
- 病理切片可见肺泡结构破坏、胶原沉积（Ashcroft评分≥5）。
- 羟脯氨酸含量较对照组显著升高（p<0.05）。
- TGF-β1、胶原基因表达上调2倍以上。
- 排除假阳性：
- 生理盐水对照组应无显著病理改变。
- 监测体重：博来霉素组前期可有短暂体重下降（<20%）。
本方案涵盖从造模到机制验证的全流程核心检测方法，适用于抗纤维化药物筛选或发病机制研究。实际操作需根据实验室条件调整，重点保证病理学与生化定量数据的可靠性。