EAE实验性过敏性脑脊髓炎模型(小鼠)

以下是关于实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型的完整技术文章，重点突出检测项目，内容严格遵循学术规范，不提及任何企业或商业品牌名称：

实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型的建立与检测体系

一、模型概述

实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE）是研究多发性硬化（MS）发病机制和治疗策略的经典动物模型。通过主动免疫（如髓鞘抗原肽MOG₃₅₋₅₅）诱发小鼠中枢神经系统炎症性脱髓鞘病变，模拟人类MS的病理生理过程。

二、核心检测项目体系

检测需贯穿疾病全程（免疫诱导期、发病潜伏期、症状高峰期、缓解期），涵盖临床、组织病理、免疫及分子水平评估。

（一）临床神经功能评估

1. 每日临床评分（Core Assessment）

   • 评分标准（常用0-5分制）：
     • 0：无症状
     • 1：尾部张力消失/轻度后肢无力
     • 2：后肢瘫痪
     • 3：双后肢完全瘫痪
     • 4：四肢瘫痪或濒死状态
     • 5：死亡
   • 记录要求：每日固定时间盲法评分，计算平均发病时间、发病率、最高分、累积积分。

2. 体重监测

   • 体重下降≥15%常早于临床症状，提示疾病发作。

（二）组织病理学检测

1. 样本采集

   • 中枢神经系统（CNS）：脊髓（腰膨大为重点）、脑干、小脑、大脑。
   • 外周免疫器官：脾脏、引流淋巴结。

2. 染色与评估

（三）免疫细胞与因子分析

1. 流式细胞术（外周/中枢）

   • 外周免疫器官：
     • Th1/Th17/Treg比例（CD4⁺IFN-γ⁺/IL-17⁺/Foxp3⁺）
     • 巨噬细胞极化（M1: CD86⁺/iNOS⁺ vs M2: CD206⁺/Arg1⁺）
   • CNS浸润细胞：
     • 单细胞悬液中CD45ʰⁱᵍʰ（巨噬/小胶质） vs CD45ˡᵒʷ（淋巴细胞）
     • 抗原特异性T细胞（MOG₃₅₋₅₅/H-2ᴰᵇ四聚体）

2. 细胞因子/趋化因子检测

   • 样本来源：血清、脊髓匀浆上清、脾细胞培养上清（抗原再刺激后）。
   • 靶分子：
     • 促炎因子：TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17A, IL-1β
     • 抗炎因子：IL-10, TGF-β
     • 趋化因子：CCL2（MCP-1）, CXCL10（IP-10）
   • 方法：多重微球检测（Luminex）或ELISA试剂盒（注：仅提方法，不涉及品牌）。

（四）血脑屏障（BBB）完整性检测

1. Evans Blue渗出法

   • 静脉注射2% EB → 灌注取脑 → 甲酰胺提取 → 620nm测吸光度。
   • 结果：EB含量↑反映BBB通透性增加。

2. 紧密连接蛋白表达

   • Western blot/IHC检测：Claudin-5, Occludin, ZO-1（脊髓血管区）。

（五）行为学辅助评估（可选）

1. 旋转棒疲劳试验
   • 评估运动协调性（潜伏期↓提示功能受损）。
2. 步态分析
   • 足印测试：步宽、步长、拖行痕迹量化。

三、关键检测时间点设计

四、数据解读要点

1. 临床-病理相关性：高评分小鼠应有显著脱髓鞘及炎性浸润。
2. 免疫动态平衡：Th17/Treg比值、CNS内M1/M2极化与疾病严重度正相关。
3. 治疗干预靶标：阻断关键趋化因子（如CCL2）或抑制Th17分化可改善病理。

五、注意事项

• 动物品系选择：C57BL/6（MOG₃₅₋₅₅）、SJL/J（PLP₁₃₉₋₁₅₁）品系发病率差异显著。
• 病理切片标准化：取相同脊髓节段（如L4-L5），连续切片避免抽样偏差。
• 盲法评估：病理评分者不知分组信息，减少主观偏倚。

本框架整合了EAE模型的多维度检测体系，为神经免疫研究提供可重复的评估方案。实验设计需遵守动物伦理规范（如IACUC批准），并根据具体科学问题调整检测重点。

注：文中所有检测方法均为科研通用技术，未涉及特定商业产品名称。实际操作需参考权威实验指南（如《Current Protocols in Immunology》）进行标准化。