DSS饮水法致溃疡性结肠炎模型(小鼠)

以下是一篇专注于DSS饮水法建立小鼠溃疡性结肠炎（UC）模型及检测项目的完整技术方案，内容严格遵循学术规范，不包含任何企业或商品名称：

DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎模型的建立与检测方案

摘要 葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulfate Sodium, DSS）饮水法是小鼠溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis, UC）研究的经典模型。本文详述模型构建流程，重点解析关键检测指标，涵盖宏观表型、组织病理学、炎症因子及氧化应激等核心评价体系。

一、模型建立方法

1. 动物分组

• 6–8周龄雄性C57BL/6小鼠（体重20±2 g）
• 分组：对照组（正常饮水）、DSS模型组（3–5% DSS饮水）
• 每组样本量：n=6–8

2. 造模流程

• DSS处理：给予3–5% DSS溶液自由饮用，连续7天
• 恢复期：更换为正常饮水，持续3–7天（可选）
• 饮水配制：DSS溶解于无菌蒸馏水，每日新配，避光保存

3. 伦理规范

• 实验方案经机构动物伦理委员会审批（批件号：XXX）
• 遵循动物福利“3R原则”，设置人道终点标准

二、核心检测项目

1. 疾病活动指数（Disease Activity Index, DAI）

• 评分标准（每日记录）:
• DAI计算：三项得分之和÷3

2. 结肠宏观形态学

• 取材：安乐死后取完整结直肠（肛门至盲肠交界）
• 检测指标:
  • 结肠长度：测量无张力状态下长度（cm）
  • 结肠重量/长度比：湿重（mg）÷长度（cm）
  • 肉眼损伤评分：黏膜充血、水肿、溃疡占比（0–4分）

3. 组织病理学分析

• 样本处理：
  1. 结肠分段固定（4%多聚甲醛，24 h）
  2. 石蜡包埋，切片厚度4–5 μm
  3. HE染色
• 评分标准（盲法评估，400×视野）:
• 总分：各指标之和（0–12分）

4. 炎症因子检测

• 样本采集：
  • 血清：眼眶采血，离心（3000 rpm, 15 min）
  • 结肠组织：匀浆后提取上清液
• 检测方法：ELISA（双抗体夹心法）
• 靶标分子：
  • 促炎因子：TNF-α, IL-1β, IL-6, IFN-γ
  • 抗炎因子：IL-10, TGF-β
  • 趋化因子：MPO（髓过氧化物酶活性）

5. 氧化应激指标

• 结肠组织匀浆液检测：
  • MDA（丙二醛）：硫代巴比妥酸法（TBARS）
  • SOD（超氧化物歧化酶）：黄嘌呤氧化酶法
  • GSH（谷胱甘肽）：DTNB显色法

6. 肠道屏障功能

• 紧密连接蛋白：
  • 免疫组化/Western Blot检测：Occludin, Claudin-1, ZO-1
• 血清内毒素：鲎试剂显色法

三、数据处理与统计分析

• 数据以均值±标准差（Mean ± SD）表示
• 组间比较：t检验或单因素方差分析（ANOVA）
• 统计软件：SPSS 25.0或GraphPad Prism 9.0
• P < 0.05为差异显著

四、模型验证要点

1. DAI动态曲线：第3天起显著升高，第7天达峰值
2. 病理特征：急性期见隐窝脓肿、杯状细胞减少、中性粒细胞浸润
3. 炎症因子：TNF-α、IL-1β较对照组升高3倍以上

五、注意事项

1. DSS批次差异显著，预实验确定最佳浓度（通常3%用于急性期，5%用于严重溃疡）
2. 小鼠品系影响敏感性：C57BL/6 > BALB/c
3. 取材时间点需匹配疾病进程（急性期：7天；恢复期：10–14天）

结论 DSS饮水法可稳定模拟人类UC的黏膜损伤与炎症反应。通过整合宏观表型（DAI、结肠缩短）、微观病理（隐窝破坏评分）、分子机制（细胞因子、氧化应激）三级评价体系，可为药物干预研究提供可靠模型基础。

图表模板

如需补充具体操作细节（如ELISA步骤、HE染色配方）或数据图表范例，请告知进一步扩展方向。