复合因素法诱导大鼠肝纤维化模型

复合因素法诱导大鼠肝纤维化模型：构建要点与核心检测项目

一、模型简介 复合因素法（CCl₄联合酒精/高脂饮食）是模拟人类肝纤维化病理进程的经典动物模型。通过反复肝损伤-修复循环，激活肝星状细胞，促进细胞外基质（ECM）过度沉积，最终形成肝纤维化。该模型具有病理特征典型、可重复性好、成本较低的优势，是抗纤维化药物筛选的核心工具。

二、模型构建核心步骤

1. 动物选择：SD或Wistar大鼠（雄性，180-220g），适应性饲养1周。
2. 关键诱导剂：
   • CCl₄（40%橄榄油溶液）：首剂0.5ml/100g腹腔注射，后续0.3ml/100g，每周2次。
   • 酒精：10%乙醇替代饮用水（逐步提高浓度）。
   • 高脂饲料：含10%猪油、2%胆固醇。
3. 周期：持续8-10周（纤维化形成期）。
4. 对照组：正常饲料+生理盐水注射+普通饮水。

三、核心检测项目（模型验证金标准） 为全面评估纤维化程度及机制，需进行多维度检测：

关键解读：

• Masson/Sirius Red染色 + Hyp定量是判断纤维化程度的必须组合。
• α-SMA阳性细胞数直接反映星状细胞活化程度。
• TGF-β1通路基因上调是纤维化启动的核心标志。

四、模型成功验证标准

1. 血清学：ALT/AST持续升高，ALB显著降低。
2. 组织学：
   • HE：肝索紊乱，炎性浸润，脂肪变性。
   • Masson/Sirius Red：汇管区蓝色/红色胶原纤维增生，形成纤维间隔（≥F2期）。
3. 生化指标：Hyp含量较对照组升高2倍以上。
4. 分子标志：α-SMA、TGF-β1表达显著上调。

五、注意事项

1. CCl₄剂量精准：过量易致急性肝坏死，不足则纤维化不形成。
2. 动态监测：第4、6、8周分批处死，观察纤维化进程。
3. 对照设置：需包含正常对照组、溶剂（橄榄油）对照组。
4. 伦理规范：遵循动物福利原则，减少痛苦。

六、应用价值 该模型能精准模拟酒精性/代谢性肝病向纤维化的演进，适用于：

• 新型抗纤维化药物药效学评价
• 纤维化形成分子机制解析
• 无创诊断标志物（如miRNA、影像学）验证

科研提示：结合转录组测序可发现新的调控靶点；利用超声剪切波弹性成像可实现无创动态监测。

通过系统性检测肝功能、氧化应激、组织病理及分子表达，可全面验证模型可靠性，为肝纤维化发病机制研究与药物开发提供强有力工具。组织学染色与Hyp定量是判断模型成功与否的不可替代的金标准。