DNFB诱导的小鼠亚急性特应性皮炎模型建立与检测方案

一、模型构建流程

1. 实验动物

   • BALB/c 或 C57BL/6 小鼠（6-8周龄，雌雄各半或统一性别）
   • 随机分组：正常对照组、模型组（n≥8/组）
   • 适应性喂养1周，自由饮水摄食

2. 致敏与激发

   • 致敏期（Day 0）：腹部剃毛，涂抹0.5% DNFB（溶于丙酮:橄榄油=4:1）50μl
   • 激发期（Day 5~24）：右耳背涂抹0.2% DNFB 10μl，隔日1次（共7次）
   • 对照组：同部位涂抹等体积溶剂

二、核心检测项目与方案

(1) 疾病严重度评估

• 耳肿胀度
  • 方法：每次激发前测量耳厚（千分尺），计算耳增厚率 耳增厚率（%） = [(激发后耳厚 - 基线耳厚) / 基线耳厚] × 100
• 皮损评分（每次激发后24h记录）
  • 评分标准（0-4分）： 0=无红肿, 1=轻度红斑, 2=明显红斑/水肿, 3=结痂/表皮破损, 4=溃疡/渗出

(2) 组织病理学分析

• 样本采集：末次激发24h后取耳组织 → 4%多聚甲醛固定 → 石蜡包埋
• 检测项目：

(3) 免疫/炎症因子检测

• 样本类型：血清、耳组织匀浆上清液
• 检测技术：ELISA / Luminex多因子检测 关键靶点：
  • Th2型因子：IL-4, IL-5, IL-13, IL-31
  • Th1型因子：IFN-γ
  • 瘙痒相关：TSLP, IL-31
  • 血清总IgE（酶标仪450nm读数）

(4) 皮肤屏障功能

• 经表皮水分丢失（TEWL）
  • 设备：便携式皮肤水分流失测量仪
  • 方法：末次激发后24h，固定环境温湿度下测量耳部
• 角质层完整性
  • 醋酸渗透试验：耳部涂抹5%醋酸溶液，记录红斑出现时间（越短提示屏障越弱）

(5) 行为学观察

• 自发瘙痒频率
  • 末次激发后24h内，视频记录30min
  • 计数耳/肩部搔抓次数（后爪接触记为1次）

三、模型验证关键点

1. 病理特征

   • 表皮增生（≥2倍正常厚度）
   • 真皮层淋巴细胞/嗜酸性粒细胞浸润
   • 肥大细胞显著增加（P<0.01 vs 对照组）

2. 免疫标志物

   • 血清IgE升高3倍以上
   • 组织IL-4/IL-13显著上调（Th2极化）

3. 时程相关性

   • 耳肿胀与激发次数呈正相关（r≥0.85）

四、注意事项

模型优势：高度模拟人类AD的Th2偏移、IgE升高、慢性瘙痒特征，适用于药物疗效评价（如JAK抑制剂、生物制剂等）；局限性：短期模型无法完全重现慢性AD的皮肤纤维化进程。

流程图示意: 致敏（D0）→ 首次激发（D5）→ 隔日激发（D7,9,11...）→ 检测（D25） ↑ 动态监测：耳肿胀（D5,7,9...）→ 皮损评分（每次激发后24h）

如需具体操作细节（如组织匀浆缓冲液配方、ELISA标准曲线建立）或数据处理模板，可进一步补充说明。