DNFB诱导的慢性特应性皮炎模型(小鼠)

DNFB诱导的小鼠慢性特应性皮炎模型构建与检测体系

一、模型建立原理

采用化学敏化剂**2,4-二硝基氟苯（DNFB）**反复刺激小鼠皮肤，模拟人类AD的慢性炎症、Th2型免疫应答及皮肤屏障功能障碍。 关键步骤：

1. 致敏期：腹部剃毛后涂抹0.5% DNFB（丙酮:橄榄油=3:1）
2. 激发期：致敏7天后，每周2–3次于耳背部或剃毛背部涂抹0.2–0.3% DNFB，持续≥6周

二、核心检测项目清单

（一）宏观表型评估

1. 皮炎严重度评分
   • 标准指标：红斑、水肿、表皮脱落、苔藓化（每项0–3分，总分12分）
   • 频次：每次激发后24小时评分
2. 耳厚度/背部皮褶厚度
   • 工具：数显千分尺（连续测量3次取均值）
3. 皮肤屏障功能
   • 经表皮水分流失（TEWL）：非侵入式探头检测
   • 皮肤pH值：扁平电极接触式测量

（二）组织病理学分析

1. 样本处理
   • 取耳部/背部皮肤→4%多聚甲醛固定→石蜡包埋→切片（4–5 μm）
2. 染色项目：
   • H&E染色：
     • 表皮厚度（钉突延长程度）
     • 真皮层炎性细胞浸润密度（高倍镜计数）
   • 甲苯胺蓝/氯乙酸酯酶染色：
     • 肥大细胞计数（≥5个视野/样本）
   • 过碘酸雪夫染色（PAS）：
     • 角质层完整性评估（角化过度/角化不全）

（三）免疫与分子生物学检测

1. 血清/组织匀浆因子检测
   • Th2型因子：IL-4, IL-5, IL-13（ELISA）
   • Th1型因子：IFN-γ, TNF-α
   • 瘙痒相关因子：IL-31, TSLP
   • IgE水平：总IgE及DNFB特异性IgE（ELISA）
2. 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）
   • 皮肤组织靶基因检测： FILAGGRIN, LORICRIN（屏障相关） TARC/CCL17, MDC/CCL22（趋化因子）
3. 流式细胞术
   • 引流淋巴结/脾脏细胞悬液：
     • CD4⁺ T细胞分型（Th1/Th2/Th17比例）
     • Treg细胞比例（CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺）

（四）行为学观察

1. 瘙痒行为记录
   • 视频监控系统记录30分钟内抓挠次数（后爪接触刺激部位）
   • 需排除理毛行为（标准：单次动作持续<1秒）

三、模型验证要点

四、注意事项

1. 品系选择：BALB/c小鼠（Th2倾向）＞ C57BL/6
2. DNFB浓度梯度测试：避免急性坏死（预实验确定最低有效浓度）
3. 动态采样设计：急性期（1–3周）vs 慢性期（6–8周）对比

创新延伸方向：可增加皮肤菌群测序（金黄色葡萄球菌定植分析）、神经纤维密度染色（PGP9.5抗体标记）等深度机制探索。

本模型通过多层次检测体系完整模拟AD核心病理特征，适用于新型药物或疗法的临床前功效评价。实验设计需遵循动物伦理规范（如疼痛管理、样本量合理化）。