MC903诱导的特应性皮炎(小鼠)

MC903诱导的小鼠特应性皮炎模型构建与检测方案

一、模型建立方法

1. 动物选择

   • BALB/c或C57BL/6雌性小鼠（6-8周龄）
   • 背部剃毛（2×2 cm²区域）

2. 诱导流程

   • 致敏阶段： 每日局部涂抹MC903（浓度范围：20-100 nM/10 μL溶解于乙醇）于剃毛区域，连续7-14天
   • 对照组： 等体积乙醇溶剂处理

二、核心检测项目与评估方法

(一) 宏观表型评估

1. 皮肤炎症严重度评分

   • 评估标准（0-4分）：
     • 红斑、水肿、表皮脱落、抓痕/出血四项独立评分（每项0-3分）
     • 每日记录，计算累积评分（SCORAD改良法）

2. 皮肤屏障功能检测

   • 经表皮水分丢失（TEWL）： 使用便携式水分测定仪，测量单位时间水分蒸发量（g·h⁻¹·m⁻²）
   • 皮肤pH值： 精密pH计检测皮表酸碱度变化

3. 瘙痒行为学监测

   • 视频记录系统量化30分钟内抓挠次数
   • 自动行为分析软件识别典型瘙痒动作

(二) 组织病理学分析

1. H&E染色

   • 关键观察指标：
     • 表皮厚度（微米级测量）
     • 海绵样水肿（细胞间水肿评分）
     • 真皮层炎性细胞浸润密度

2. 特殊染色

   • 甲苯胺蓝染色：肥大细胞计数（个/mm²真皮层）
   • PAS染色：表皮增生及角化异常评估

3. 组织学评分系统

   • 炎症程度（0-3分）：根据浸润深度与广度分级
   • 表皮增生指数：基底层至角质层厚度比

(三) 免疫与分子指标检测

1. 血清/组织细胞因子谱

   • ELISA定量检测：
     • Th2型：IL-4, IL-5, IL-13, TSLP
     • Th1型：IFN-γ
     • Th17型：IL-17A, IL-22
     • 瘙痒相关：IL-31

2. 流式细胞术免疫浸润分析

   • 皮肤单细胞悬液标记：
     • CD4⁺ T细胞（Th2/Th17亚群）
     • CD11b⁺Gr-1⁺髓系细胞
     • FcεRI⁺肥大细胞

3. 关键通路蛋白表达

   • Western Blot/IHC检测：
     • JAK-STAT通路：pSTAT3, pSTAT6
     • NF-κB通路：p65核移位

4. 瘙痒神经敏感性标志物

   • 免疫荧光染色：
     • 神经纤维密度（抗PGP9.5抗体）
     • TRPV1/TRPA1通道表达

(四) 皮肤微生物组分析（可选）

• 16S rRNA测序： 皮损部位菌群多样性（Shannon指数）及金黄色葡萄球菌相对丰度

三、模型验证要点

1. 动态时间节点

   • 基线期（Day 0）→ 急性期（Day 7）→ 慢性期（Day 14）

2. 双盲评估

   • 组织学切片由两名病理学家独立评分
   • 行为学数据自动采集避免主观偏差

3. 机制干预验证

   • 阳性对照：地塞米松（0.1%乳膏）局部治疗
   • 阴性对照：溶剂处理组

四、模型特点与局限性

优势： ✅ 快速诱导Th2优势免疫应答（48h内TSLP↑） ✅ 重现表皮增生、瘙痒等核心表型 局限性： ⚠️ 不依赖遗传性皮肤屏障缺陷 ⚠️ 需控制环境温湿度（温度＞25℃加重表型）

本方案通过多维度检测实现表型-免疫-神经通路的整合分析，适用于AD发病机制研究及药物疗效评价。实验操作需遵循动物伦理审查要求（如IACUC批准），原始数据应公开存档以提高可重复性。