IL-23诱导小鼠耳廓银屑病皮损样模型(小鼠)

以下是关于 IL-23 诱导小鼠耳廓银屑病皮损样模型 的完整方案，重点关注 检测项目，内容严格避免涉及任何企业名称，符合科研规范：

IL-23 诱导小鼠耳廓银屑病皮损样模型的建立与检测方案

适用对象：C57BL/6 或其他易感品系小鼠

一、模型建立方法

1. 试剂准备：

   • 重组小鼠 IL-23（溶于无菌 PBS，浓度为 1–5 μg/mL）
   • 对照组：等体积 PBS

2. 操作步骤：

   • 每日向小鼠单侧耳廓真皮层注射 IL-23 溶液（10 μL），连续 5–7 天。
   • 对侧耳廓注射 PBS 作为自体对照。

3. 模型特点：

   • 快速诱导（3–7 天）表皮增厚、红斑、鳞屑等银屑病样表型。
   • 病理特征：角质形成细胞增殖、炎性细胞浸润、血管扩张。

二、核心检测项目

（一）宏观表型评估

1. 耳廓厚度测量：

   • 工具：千分尺或无创厚度仪
   • 频率：每日注射前后测量，计算厚度差值（Δ厚度 = 处理侧厚度 - PBS 侧厚度）。

2. 红斑与鳞屑评分：

   • 红斑评分（0–4 分）：无红斑→ 重度红斑（4）。
   • 鳞屑评分（0–4 分）：无鳞屑→ 广泛厚鳞屑（4）。

（二）组织病理学检测

1. 样本采集：

   • 取耳廓组织，4% 多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片（厚度 5 μm）。

2. 染色与观察：

   • H&E 染色：
     • 评估表皮厚度（μm）、真皮炎症细胞浸润程度。
     • 病理特征：角化过度、角化不全、Munro 微脓肿。
   • PAS 染色：验证角质层中性粒细胞聚集。

（三）分子生物学检测

1. qRT-PCR（关键炎症因子）：

   • 靶基因：PlaintextIL-17A, IL-22, TNF-α, IL-1β, S100A7（Psoriasin）, DEFB4（β-defensin 2）
   • 组织处理：液氮速冻，TRIzol 法提取 RNA。
   • 内参基因：GAPDH 或 β-actin。

2. 免疫组化/免疫荧光：

   • 靶蛋白：
     • 增殖标志物：Ki67（表皮基底细胞阳性率）
     • 炎症细胞：CD3（T 细胞）、F4/80（巨噬细胞）、Ly6G（中性粒细胞）
     • 角质形成细胞活化：K16

（四）细胞因子水平检测

1. 蛋白提取：

   • 耳组织匀浆→离心取上清→BCA 法定量蛋白浓度。

2. 检测方法：

   • ELISA：
     • 定量 IL-17A, IL-22, TNF-α 等细胞因子浓度（pg/mg 总蛋白）。

三、模型验证要点

1. 成功标志：

   • 表皮厚度增加 ≥ 2 倍（vs. PBS 对照组）。
   • 真皮层 CD3⁺ T 细胞浸润显著升高。
   • IL-17A、S100A7 基因表达上调 > 5 倍。

2. 质量控制：

   • 排除注射损伤：PBS 对照组应无显著炎症反应。
   • 批次一致性：同一批 IL-23 诱导的表型变异度 < 20%。

四、注意事项

1. 注射操作：
   • 使用 33G 微针头，避免穿透软骨层导致炎症偏差。
2. 时间窗：
   • 表型高峰期为第 5–7 天，需在此窗口完成检测。
3. 伦理规范：
   • 实验方案需通过动物伦理委员会审批。

五、模型局限性

1. 不模拟全身性银屑病（如关节炎）。
2. 需结合其他模型（如咪喹莫特诱导）验证治疗策略。

结论：该模型通过直接激活 IL-23/Th17 轴，快速模拟银屑病核心病理特征。通过 耳廓厚度监测、H&E 病理评分、qRT-PCR 炎症因子谱分析及免疫细胞浸润检测 可全面评估药效或致病机制。

备注：所有试剂需注明纯度级别（如 ≥98%），具体浓度应根据预实验结果优化。