小鼠阴道上皮有丝分裂模型(小鼠)

发布时间：2025-06-10 08:19:14 阅读量：6 作者：生物检测中心
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小鼠阴道上皮有丝分裂模型检测项目详解

该模型通过观察阴道脱落上皮细胞形态变化及有丝分裂活动，评估雌激素水平及生殖周期阶段（动情周期），是研究生殖内分泌、药物作用及毒性评价的重要工具。

核心检测项目：

  1. 阴道脱落细胞学涂片检查 (Vaginal Smear Cytology)：

    • 目的： 确定小鼠所处的动情周期阶段（间情期、发情前期、发情期、发情后期）。
    • 方法： 无菌生理盐水冲洗阴道，收集冲洗液离心或直接涂片，固定染色（常用姬姆萨、HE或巴氏染色）。
    • 检测内容与指标：
      • 主要细胞类型识别与计数：
        • 有核上皮细胞 (Nucleated Epithelial Cells)： 圆形或卵圆形，胞质少，核大清晰。优势期：间情期、发情前期。
        • 角化上皮细胞 (Cornified Epithelial Cells / Squames)： 多边形、无核或核固缩碎裂、胞质角化透明。优势期：发情期。
        • 白细胞 (Leukocytes)： 体积小、圆形深染。优势期：间情期晚期、发情后期。
      • 细胞比例计算： 统计每种细胞类型在视野中的百分比。
      • 动情周期阶段判定标准：
        • 间情期 (Diestrus)： 大量白细胞 + 少量有核上皮细胞 (或无)。
        • 发情前期 (Proestrus)： 大量有核上皮细胞为主 + 少量角化上皮细胞 + 白细胞消失或极少。
        • 发情期 (Estrus)： 大量角化上皮细胞 (+/- 少量或无有核上皮细胞/白细胞)。
        • 发情后期 (Metestrus)： 角化上皮细胞 + 大量白细胞 + 少量有核上皮细胞。

  2. 阴道上皮有丝分裂指数 (Mitotic Index, MI) 检测：

    • 目的： 定量评估阴道上皮基底细胞层的增殖活性，这是雌激素刺激最直接的效应之一。峰值出现在发情前期。
    • 方法：
      • 组织学切片法（金标准）：
        • 取材固定： 处死小鼠，完整剥离阴道组织，固定。
        • 石蜡包埋切片： 制作阴道组织横断面或纵断面石蜡切片。
        • 染色： HE染色。
        • 观察计数： 高倍镜下观察阴道上皮基底细胞层。
        • 计算： 计数每1000个基底细胞中处于有丝分裂各期（前期、中期、后期、末期）的细胞数。MI = (处于有丝分裂期的细胞数 / 观察的基底细胞总数) × 100%。
      • 涂片法（间接评估）： 在发情前期的阴道涂片中，有时可在有核上皮细胞中观察到有丝分裂相，但数量较少且不稳定，不如组织切片法准确可靠。

  3. 阴道上皮组织病理学检查：

    • 目的： 更全面地评估上皮结构、厚度、分化状态及细胞形态，辅助验证涂片和MI结果。
    • 方法： 同MI检测的组织学切片制备和HE染色。
    • 检测内容与指标：
      • 上皮厚度测量： 使用显微测微尺测量基底膜到表层细胞的距离（µm）。雌激素刺激下增厚。
      • 分层结构观察： 观察基底细胞层、棘细胞层、颗粒层、角质层的清晰度和细胞形态变化。
      • 细胞形态学： 观察基底细胞、棘细胞等的形态、大小、核质比、核分裂象（MI基础）、是否有异常改变（如空泡变性、坏死）。
      • 角化程度： 评估表层细胞角化是否完全（与涂片中角化细胞比例对应）。

  4. 细胞增殖标志物免疫组织化学/免疫荧光检测 (可选)：

    • 目的： 更特异、更灵敏地标记处于增殖周期的细胞。
    • 常用标志物：
      • PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen)： 标记S期及部分G1/G2期细胞。
      • Ki-67： 广泛标记除G0期外的所有活跃增殖期细胞。
      • 磷酸化组蛋白 H3 (pHH3)： 特异性标记有丝分裂期（M期）细胞，是评估MI的优异替代方法。
    • 方法： 在阴道组织切片上进行免疫组化(IHC)或免疫荧光(IF)染色。
    • 检测指标： 阳性细胞率（阳性细胞数 / 总基底细胞数 × 100%）。

关键实验要点：

  1. 动物选择与适应： 使用性成熟、体重适宜的健康雌性小鼠。实验前至少适应环境一周，维持稳定光暗周期（如12小时光照/12小时黑暗）。
  2. 取样时间： 需考虑动情周期的动态变化。通常在每日固定时间（建议早晨）取样，连续多日以完整覆盖周期。动态监测或药物干预研究需精确安排取样时点。
  3. 取样操作规范： 动作轻柔避免损伤阴道黏膜。建议使用一次性无菌塑料滴管或专用生理盐水冲洗取样。
  4. 样本处理及时性： 涂片尽快固定；组织尽快固定以保证形态完好。
  5. 盲法阅片： 由不知晓分组信息的实验人员进行细胞分类计数、MI计数或标志物阳性判断，减少主观偏倚。
  6. 重复性与样本量： 每个检测项目需有足够数量的样本（小鼠数）、视野或细胞数以保证结果的可靠性。通常每组建议不少于5-8只动物。
  7. 实验伦理： 所有操作需遵循动物福利伦理规范，尽量减少动物痛苦。处死方法需人道。

总结：

小鼠阴道上皮有丝分裂模型的核心检测项目聚焦于细胞形态学分析（涂片）、细胞增殖活性量化（MI或增殖标志物） 以及 组织结构病理学评估。通过系统性地结合阴道脱落细胞学涂片（确定周期阶段）、阴道上皮组织切片的有丝分裂指数/增殖标志物检测（评估增殖活性）以及上皮厚度和形态学观察，可以全面、客观地评价雌激素的生物活性、药物对生殖内分泌的影响及生殖毒性效应。严格规范的实验操作和数据分析是获得可靠结果的关键。