胆管结扎诱导肝纤维化动物模型的检测项目
胆管结扎(BDL)是研究肝纤维化和肝硬化的经典动物模型，主要通过手术结扎胆总管引起胆汁淤积性肝损伤。以下是BDL模型的完整检测方案，重点介绍各项检测指标及其意义。
一、术前准备
-
动物选择：
- 常用SD大鼠或C57BL/6小鼠
- 雄性为主(避免雌激素对肝纤维化的影响)
- 体重：大鼠200-250g，小鼠20-25g
- 适应性饲养1周
-
术前准备：
- 禁食不禁水12小时
- 术前消毒手术器械
- 准备麻醉药物(如异氟烷或戊巴比妥钠)
二、手术操作
-
胆管结扎手术步骤：
- 麻醉动物后腹部备皮消毒
- 正中切口约2cm(大鼠)或1cm(小鼠)
- 找到胆总管(肝门区白色管道)
- 双重结扎胆总管(近端和远端)
- 中间切断胆总管(假手术组仅分离不结扎)
- 逐层缝合切口
-
术后护理：
- 单笼饲养24小时
- 提供5%葡萄糖水
- 监测动物状态
三、检测时间点
通常选择术后不同时间点检测(根据研究目的调整)：
- 短期模型：3天、7天、14天
- 长期模型：21天、28天
四、核心检测项目
(一) 肝功能评估
-
血清生化指标：
- ALT和AST：肝细胞损伤标志
- ALP和GGT：胆管损伤和胆汁淤积标志
- 总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)：胆汁淤积程度
- 总胆汁酸(TBA)：胆汁代谢指标
- 白蛋白(ALB)和球蛋白(GLB)：肝脏合成功能
-
凝血功能：
- PT(凝血酶原时间)
- APTT(活化部分凝血活酶时间)
(二) 肝纤维化评估
-
组织病理学：
- HE染色：观察肝组织结构、炎症细胞浸润、胆管增生
- Masson三色染色：胶原纤维沉积(蓝色)
- 天狼星红染色：区分I型和III型胶原
- 免疫组化：α-SMA(活化的肝星状细胞标志)
-
纤维化相关分子检测：
- 羟脯氨酸含量：反映胶原总量
- qRT-PCR检测：
- 促纤维化因子：TGF-β1, CTGF, TIMP-1, MMP-2/9
- 炎症因子：TNF-α, IL-1β, IL-6
- Western blot检测：
- α-SMA, Collagen I/III, TGF-β1/Smad通路蛋白
-
非侵入性检测：
- 肝脏超声弹性成像(如有条件)
- 血清纤维化标志物：HA(透明质酸), LN(层粘连蛋白), PCIII(III型前胶原), CIV(IV型胶原)
(三) 氧化应激指标
- MDA：脂质过氧化产物
- SOD：超氧化物歧化酶活性
- GSH：谷胱甘肽含量
- CAT：过氧化氢酶活性
(四) 胆汁酸代谢相关检测
- 血清胆汁酸谱分析(LC-MS)
- 肝脏胆汁酸转运蛋白表达：
- NTCP, BSEP, MRP2等
- 法尼醇X受体(FXR)信号通路
(五) 其他相关检测
- 肠道菌群分析(16S rRNA测序)
- 肝组织铁含量测定(普鲁士蓝染色)
- 门静脉压力测量(如有条件)
五、数据分析要点
-
组织学评分系统：
- 炎症评分(0-4级)
- 纤维化分期(Ishak或METAVIR评分系统)
-
胶原面积定量：
- 天狼星红染色阳性区域图像分析
-
统计学处理：
- 数据以mean ± SD表示
- 组间比较用t检验或ANOVA
- P<0.05认为有统计学意义
六、模型验证要点
-
成功标准：
- 血清TBIL显著升高(术后3天)
- 肝组织胆管增生明显(术后7天)
- 明显纤维化形成(术后14-21天)
-
质量控制：
- 假手术组各项指标应基本正常
- 模型组死亡率控制在20%以内
七、常见问题及解决方案
-
术后高死亡率：
- 改进手术技巧
- 加强术后护理
- 使用抗生素预防感染
-
纤维化程度不均：
- 确保结扎位置一致
- 增加样本量
-
假手术组异常：
- 避免过度牵拉胆管
- 确保手术时间相近
本方案提供了BDL模型的标准检测流程，研究者可根据具体实验目的和条件选择适当指标组合，为肝纤维化机制研究和药物评价提供可靠数据。