紫杉醇诱导的化疗痛模型(大鼠)

紫杉醇诱导的大鼠化疗神经病理性疼痛模型建立与检测方案

一、模型建立

1. 实验动物

   • SD/Sprague-Dawley大鼠，雄性，180-220g
   • 标准饲养条件（12h光暗周期，自由进食饮水）

2. 造模方法

   • 紫杉醇注射液：2 mg/kg（溶剂为生理盐水+助溶剂）
   • 给药方式：腹腔注射（i.p.）
   • 给药方案：隔日注射，共4次（累积剂量8 mg/kg）
   • 对照组：等体积溶剂注射

二、核心检测项目

(一) 机械性痛觉超敏（Mechanical Allodynia）

• 检测设备：von Frey细丝
• 方法：
  1. 大鼠置于金属网笼适应30分钟
  2. 使用0.4-15g力值细丝垂直刺激后足掌心
  3. 记录50%缩足阈值（Up-Down法）
• 时间点：基线（给药前）、每次给药后48h、末次给药后第7/14/21天

(二) 热痛觉过敏（Thermal Hyperalgesia）

• 检测设备：足底热辐射仪
• 方法：
  1. 大鼠置于玻璃平板上适应20分钟
  2. 聚焦热光源照射后足掌心
  3. 记录缩足潜伏期（基线值10-14s，上限20s防灼伤）
• 时间点：同机械痛检测

(三) 冷痛觉过敏（Cold Allodynia）

• 检测方法：丙酮试验
  1. 后足掌心滴注50μl丙酮
  2. 记录30s内抬足/舔足次数
• 时间点：末次给药后第7/14/21天

(四) 运动功能评估（排除神经损伤干扰）

• 旋转棒试验：
  • 大鼠置于加速转棒（5-40rpm/5min）
  • 记录跌落潜伏期（检测运动协调性）
• 步态分析：
  • 足底墨水印记测试步长及足印宽度

三、神经病理学检测（终末取组织）

(一) 坐骨神经形态学

• 样本处理：
  1. 4%多聚甲醛固定 → 石蜡包埋
  2. 切片（5μm）→ H&E染色
• 观察指标：
  • 有髓神经纤维密度
  • 轴突萎缩/脱髓鞘比例
  • 炎性细胞浸润

(二) 背根神经节（DRG）病理

• 免疫组化检测：
  • 抗体标记：NF-200（大神经元）、IB4（小神经元）、CGRP（肽能神经元）
  • 统计阳性神经元数量及形态异常比例

(三) 脊髓背角胶质细胞活化

• 免疫荧光检测：
  • 星形胶质细胞标记：GFAP
  • 小胶质细胞标记：Iba-1
  • 计算活化细胞占比（胞体增大、突起缩短）

四、分子生物学检测（可选）

• qPCR/Western Blot靶点：
  • 炎症因子：TNF-α, IL-1β, IL-6
  • 离子通道：TRPV1（热痛）、TRPA1（冷痛）、Nav1.8（机械痛）
  • 神经损伤标记：ATF3
• 样本来源：L4-L6 DRG、脊髓腰膨大段

五、模型验证要点

1. 成功标准：

   • 机械缩足阈值下降 >40%（vs 基线）
   • 热缩足潜伏期缩短 >25%
   • 病理确认轴突退化

2. 溶剂对照：

   • 溶剂组无痛敏行为改变（排除助溶剂影响）

3. 时效性：

   • 痛敏持续≥21天（末次给药后）

六、注意事项

• 动物福利：单笼饲养防互咬，提供筑巢材料
• 检测顺序：先行为学后电生理，终末取组织
• 昼夜节律：固定检测时段（AM 8:00-12:00）

本方案基于经典文献（Polomano et al., Pain 2001; Flatters et al., Pain 2004）优化，检测项目覆盖行为学-病理-分子三级验证，适用于化疗神经毒性机制及药物干预研究。

此方案完全去商业化，聚焦科研本体，检测指标设计符合国际疼痛研究协会（IASP）指南要求。