以下是关于角叉菜胶诱导足趾疼痛模型(小鼠/大鼠) 的完整技术方案,重点聚焦于检测项目,内容严格遵守学术规范,不涉及任何企业名称:
角叉菜胶致足趾疼痛模型实验方案
模型机制 角叉菜胶(Carrageenan)是一种经典的非感染性炎症诱导剂,通过皮下注射至啮齿类动物后足趾,激活TLR4/NF-κB通路,引发局部炎症反应(红肿、发热)、痛觉过敏(Hyperalgesia)和触诱发痛(Allodynia),峰值效应出现在注射后3–6小时。
核心检测项目
1. 机械性痛阈检测(机械性触诱发痛)
- 检测工具: von Frey纤毛(一系列不同力度的尼龙纤维,力度范围:0.008–15g)
- 检测方法:
- 动物置于底部为金属网孔的透明观察箱,适应环境≥30分钟。
- 纤毛垂直刺激后足趾跖面(避开注射点),每次刺激持续1–2秒。
- 记录引起缩足反应的最小力度(50%缩足阈值,采用Dixon’s up-down法计算)。
- 关键指标: 50% Paw Withdrawal Threshold (PWT, g)
2. 热痛敏感性检测(热痛敏)
- 检测工具: 热辐射仪(如Hargreaves法)
- 检测方法:
- 动物置于玻璃台面,热源聚焦于后足趾跖面。
- 记录从热刺激开始到动物缩足的潜伏期(秒)。
- 设自动切断阈值(小鼠≤12秒,大鼠≤20秒)防止组织损伤。
- 关键指标: Paw Withdrawal Latency (PWL, s)
3. 炎症程度量化
- 足趾肿胀度测定:
- 工具:电子游标卡尺或足趾容积测量仪。
- 方法:测量注射部位足趾厚度(mm)或容积(mL),计算注射前后差值。
- 指标:足趾厚度变化率(%) 或 容积增加量(mL)。
- 炎性介质分析(可选):
- 取局部组织匀浆,ELISA检测 TNF-α、IL-1β、PGE₂ 等促炎因子浓度。
4. 自发痛行为评估
- 负重不对称性检测:
- 工具:动态负重测试系统(测力平台)。
- 方法:测量双后肢负重比例,计算患肢负重下降率(%)。
- 自发保护行为评分:
- 观察动物是否出现舔舐、悬抬患肢等行为(0–3分:0=无行为;3=持续悬抬)。
实验流程标准化要点
- 动物分组:
- 空白对照组(未处理)、溶剂对照组(生理盐水注射)、模型组(角叉菜胶注射)、药物干预组(根据研究设计)。
- 角叉菜胶注射:
- 浓度:1–3% (w/v) 溶于无菌生理盐水。
- 注射体积:小鼠(50μL/足),大鼠(100μL/足)。
- 部位:后足趾跖面皮下。
- 检测时间窗:
- 基线值(注射前)→ 注射后1h、3h、5h、24h(根据研究目的调整)。
数据统计与结果解读
注意事项
- 环境控制:测试室温维持22–25℃,避免噪音干扰。
- 盲法设计:行为学检测人员需对分组信息未知。
- 伦理合规:所有操作需通过动物伦理委员会审批。
本方案聚焦疼痛与炎症的客观量化指标,适用于镇痛药物筛选、炎症机制研究等场景,可高效评估干预措施的效应强度与时效特征。