佐剂CFA引起的足趾疼痛模型(小鼠/大鼠) - 中析研究所生物检测中心

CFA佐剂诱导啮齿类动物足趾炎性疼痛模型检测指南

模型简介： 弗氏完全佐剂（CFA）诱导的足趾炎性疼痛模型是研究慢性炎症性疼痛机制的经典模型。通过足底注射CFA引发局部强烈且持久的炎症反应，模拟临床炎性疼痛状态，适用于镇痛药物评价及疼痛机制研究。

核心检测项目：

一、行为学检测（核心评价指标）

机械性痛觉过敏：
- Von Frey 纤维丝试验： 最常用方法。
  - 原理： 使用不同弯曲力值的细丝垂直刺激足底或足趾部位。
  - 检测： 测定引起动物缩足或舔足反射的最小力值（50% 缩足阈值）。CFA注射后，阈值显著下降，表明对轻微机械刺激敏感性增加。
  - 操作要点： 动物置于通透平台，适应环境。测试避开注射点附近水肿区。常用“上下法”或“Dixon 上下法”计算阈值。多次测量取均值。
热痛觉过敏：
- 辐射热试验： 最常用方法。
  - 原理： 高强度光束聚焦照射足底。
  - 检测： 测定从照射开始到动物缩足或舔足的潜伏期（秒）。CFA注射后，潜伏期显著缩短，表明对热刺激敏感性增加。
  - 操作要点： 设定合适光强度（避免组织损伤）。设定截止时间防止灼伤（通常15秒）。多次测量取均值。
- 热板试验： 适用于全身热痛敏评估。
  - 原理： 将动物置于设定温度（通常52-55℃）的金属板。
  - 检测： 测定出现舔后足或跳跃等疼痛反应的潜伏期（秒）。注射部位同侧后足的疼痛反应通常更剧烈。
  - 操作要点： 设定截止时间（通常30秒）。
自发痛/负重差异：
- 动态负重测试：
  - 原理： 动物在特殊笼具中行走，感应器测量双后肢承受的压力。
  - 检测： 计算注射侧后肢与对侧后肢的承重差异百分比或差值。CFA注射后，注射侧承重显著减少。
  - 优点： 反映动物在自然状态下的自发疼痛保护行为。
- 自发性疼痛行为评分：
  - 原理： 观察固定时间内动物抬腿、舔舐或保护注射足的行为。
  - 检测： 记录上述行为发生的频率或持续时间。CFA注射后行为显著增加。
压痛觉过敏（可选）：
- 电子压痛仪：
  - 原理： 使用尖端钝化的探头向足趾或足底施加线性递增的压力。
  - 检测： 测定引起缩足反射的压力阈值（g）。CFA注射后阈值显著下降。

二、炎症反应评估

足趾体积测量：
- 排水体积法： 将足趾浸入装有液体的容器，测量液体上升的体积（最经典）。
- 电子游标卡尺测量： 测量足跖部厚度或宽度。
- 激光测距法： 非接触式测量足趾尺寸。
- 目的： 量化CFA引起的局部水肿程度，是炎症的直接指标。
局部温度检测（可选）：
- 红外测温仪： 非接触测量注射部位皮肤表面温度。
- 目的： 评估炎症相关的局部皮温升高。

三、组织学与生化检测（机制研究）

组织病理学检查：
- 取材： 注射后不同时间点取足底组织。
- 染色： H&E（观察炎症细胞浸润、组织水肿、结构破坏）、免疫组化/免疫荧光（检测特定炎症因子、胶质细胞标志物、神经元活化标志物如c-Fos）。
- 目的： 直观观察炎症程度、细胞浸润类型、神经激活情况。
炎症因子检测：
- 取材： 足底组织匀浆或局部灌洗液。
- 检测方法： ELISA、Luminex多因子检测、qRT-PCR（mRNA水平）。关键指标： TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10, CCL2 (MCP-1), CXCL1 (KC/GRO-α), NGF, PGE2。
- 目的： 量化促炎与抗炎介质水平，阐明疼痛的分子机制。
神经活性物质检测（可选）：
- 取材： 背根神经节、脊髓背角组织。
- 检测方法： 免疫组化/免疫荧光、Western Blot、qRT-PCR。关键指标： 降钙素基因相关肽 (CGRP)、P物质 (SP)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP - 星形胶质细胞)、离子钙接头蛋白 (Iba1 - 小胶质细胞)。
- 目的： 评估外周和中枢敏感化状态。