以下是关于热板法、光热甩尾法、压痛法及冷刺激仪(适用于小鼠/大鼠)的完整技术说明,重点阐述其检测项目与核心内容,确保信息中立无商业指向:
一、 热板法 (Hot Plate Test)
检测项目:
- 热痛阈潜伏期: 动物置于恒定温度(通常 50-55℃)金属板上的起始时间至出现疼痛反应行为的时间(秒)。
- 疼痛反应行为:
- 小鼠:舔舐后足(主要指标)、快速抬足、跳跃。
- 大鼠:舔舐后足、抬足、跳跃、嘶叫。
- 最大暴露时间: 预设安全截止时间(通常 30-60 秒),防止组织损伤。
核心要点:
- 评价中枢介导的 热痛敏感性。
- 操作简便,结果稳定,广泛用于评估阿片类、NSAIDs等镇痛药效果。
- 动物需四肢接触热板表面,避免悬空。
二、 光热甩尾法 (Tail-Flick Test / Radiant Heat)
检测项目:
- 甩尾潜伏期: 聚焦光源(通常为红外或卤素光源)照射鼠尾特定部位开始至动物尾巴剧烈甩动回避的时间(秒)。
- 光源强度与定位: 精确控制光束强度、直径及照射尾部位置(常选尾中段下1/3或1/2处)。
- 最大照射时间: 预设截止时间(通常 10-15 秒)以防止组织灼伤。
核心要点:
- 评价 脊髓反射性痛阈,主要反映脊髓水平的疼痛处理机制。
- 对阿片类药物敏感,常用于筛选脊髓以上作用镇痛药。
- 需避免动物运动或固定装置压迫尾部影响血流。
三、 压痛法 (Electronic Von Frey / Pressure Test)
检测项目:
- 机械痛阈:
- 足底压痛阈值: 使用电子测痛仪探针(或标准化纤维丝)垂直施压于后足跖部,记录动物缩足或抬足的瞬时压力值(g)。
- 尾部压痛阈值: 施加压力于鼠尾根部或中部,记录动物甩尾或嘶叫时的压力值(g)。
- 动态阈值评估: 慢性疼痛模型中可测量患侧与健侧的阈值差异。
核心要点:
- 评价 机械性痛觉过敏或触诱发痛(如神经病理性疼痛模型)。
- 能区分痛觉过敏(阈值降低)和痛觉超敏(非疼痛刺激诱发疼痛)。
- 需多次测量取平均值,避免连续刺激同一部位导致组织敏化。
四、 冷刺激仪 (Cold Stimulation Apparatus)
检测项目:
- 丙酮蒸发试验:
- 冷痛行为评分: 将微量丙酮(5-10μl)涂于足底,记录动物在1-2分钟内舔舐/抬足次数或持续时间(秒)。
- 行为分级: 0分(无反应)- 3分(强烈持续舔舐或抬足)。
- 冷板试验:
- 抬足次数/时长: 动物置于低温金属板(0-4℃),记录特定时间内(如5分钟)后足抬离冷面的次数或总时长(秒)。
- 移动潜伏期: 动物首次因寒冷不适而移动的时间(秒)。
核心要点:
- 评价 冷痛觉过敏(神经病理痛核心症状)及 冷敏感性。
- 丙酮试验模拟瞬时冷刺激,冷板试验模拟持续性冷暴露。
- 对神经损伤模型(CCI、SNI等)及抗神经病理性疼痛药物评价敏感。
方法选择与注意事项
伦理与技术要点:
- 动物福利优先: 所有实验必须符合伦理规范,设定严格截止时间,避免组织损伤。
- 环境标准化: 统一实验室温湿度、光照、噪音环境,动物需提前适应测试环境。
- 操作一致性: 固定方法、刺激部位、仪器参数需保持一致,由同一操作者完成以减少偏差。
- 基础阈值筛选: 实验前需测量动物基础痛阈,排除先天痛觉异常个体。
- 数据处理: 潜伏期数据需进行截尾数据处理(如 %MPE:最大可能效应百分比)。
以上方法均为国际通用的标准化疼痛行为学检测手段,通过量化动物对不同刺激(热、光热、机械、冷)的行为反应,客观评估其痛觉敏感性变化,为疼痛机制研究与镇痛药物开发提供核心实验依据。