小鼠尾悬挂实验：方法与核心检测项目
尾悬挂实验（Tail Suspension Test, TST）是一种广泛应用的经典行为学测试，主要用于评估小鼠在无法逃脱的应激状态下的“行为绝望”程度，是筛选潜在抗抑郁药物和研究抑郁症相关神经机制的重要工具。
一、 实验原理 将小鼠尾部固定，使其头向下悬吊于半空中。在这种无法逃脱的轻度应激环境下，小鼠通常会经历一段时间的挣扎尝试逃脱，随后进入一种相对静止不动（Immobility）的状态。这种“不动状态”被认为反映了类似行为绝望或习得性无助的状态。抗抑郁药物通常能显著缩短这种不动时间。
二、 实验器材与环境
- 悬吊装置： 通常是一个具有隔间的箱子（避免动物间视觉干扰），顶部有水平的横杆或挂钩。
- 悬吊配件： 医用胶带或特定适配器（确保牢固悬挂小鼠尾部末端1-2cm处，不损伤尾部）。
- 行为记录系统： 高清摄像头（置于动物正前方/侧方）。
- 视频分析软件： 用于记录和分析动物行为。
- 计时器。
- 实验环境： 安静、光线均匀（避免强光直射或阴影干扰）、温度适宜（22-25℃）的独立行为学测试室。实验前需将小鼠移入该环境适应至少1小时。
三、 实验操作流程（示例）
- 动物准备： 健康成年小鼠（通常8-12周龄），按实验设计分组（如对照组、模型组、药物处理组等）。实验前在行为测试室适应环境至少1小时。
- 悬挂操作：
- 轻柔抓住小鼠尾部，将其尾部末端约1-2cm处用胶带/适配器固定。
- 迅速将小鼠悬挂于悬吊装置的挂钩上，确保小鼠头部向下，身体悬空，不能接触任何箱壁或底面。
- 立即启动摄像记录和计时。
- 测试时长： 标准测试时间通常为6分钟。
- 行为记录： 整个测试过程需进行完整视频录制。
- 结束与处理： 测试结束后，轻柔取下小鼠，放回笼中休息观察。彻底清洁悬吊装置和挂钩（如使用胶带则换新），避免气味干扰。
四、 核心检测项目与分析（重点）
检测的核心在于量化小鼠在悬吊状态下的行为模式，特别是“不动时间”：
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主要量化指标：
- 总不动时间： 这是实验最核心的指标。指在整个测试期间（通常6分钟）内，小鼠处于完全不挣扎、被动悬挂状态的总时长（单位：秒）。抗抑郁样效应通常表现为总不动时间显著缩短。
- 不动时间百分比： (总不动时间 / 总测试时间) * 100%。提供相对值的比较。
- 挣扎潜伏期： 从悬挂开始到小鼠首次进入持续不动状态（如持续≥2秒）所经历的时间（秒）。潜伏期延长可能反映更强的抗应激或抗绝望倾向。
- 挣扎次数： 在整个测试过程中，小鼠出现挣扎行为的次数（需明确定义挣扎的判定标准）。
- 挣扎总时长： 整个测试期间所有挣扎行为时间的总和（秒）。抗抑郁药通常增加挣扎总时长。
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行为模式分类（基于视频分析）：
- 不动： 动物身体松弛，除必要的呼吸外无任何主动肢体或躯体运动，呈被动悬挂姿态。这是核心观测状态。
- 挣扎：
- 剧烈挣扎： 强有力的、幅度大的四肢蹬踹、扭动躯干、试图向上攀爬尾巴等行为。
- 轻微挣扎/摇摆： 幅度较小、力量较弱的四肢划动或躯体轻微扭摆、晃动。
- 静止不动： 区分于“不动”，可能指短暂停顿或身体保持静止但肌肉并未完全松弛的状态（分析软件有时区分）。
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附加观察指标（定性/半定量）：
- 行为模式转变： 观察动物从挣扎期过渡到不动期的模式是否发生改变（如药物是否延缓进入不动期）。
- 应激反应： 是否有排便、排尿、发出超声或可听叫声等。
- 初始反应： 悬挂瞬间的剧烈反应（可作为急性应激反应指标）。
五、 数据分析与结果解读
- 组间比较： 主要比较不同处理组（如对照组vs药物组）在总不动时间、不动时间百分比、挣扎总时长等核心指标上的统计学差异。
- 视频分析软件： 现代实验通常依赖专业行为分析软件（如EthoVision, ANY-maze, Smart等）进行自动化或半自动化分析，提高客观性和效率。软件需能准确识别和区分不同行为状态。
- 解读要点：
- 显著缩短的不动时间和/或增加的挣扎时间通常解释为该处理（如药物）具有抗抑郁样效应。
- 缩短的挣扎潜伏期也可支持抗抑郁样效应。
- 必须谨慎： “不动”并非简单的“放弃”，也包含能量保存策略。结果需结合其他抑郁行为测试（如强迫游泳）和生化/分子检测综合判断。兴奋剂也可能减少不动时间（非特异效应），需注意区分。
六、 注意事项
- 动物福利与伦理： 严格遵守动物实验伦理规范，获得伦理委员会批准。实验操作需轻柔，避免尾部损伤或过度应激。单次悬吊时间不宜过长（标准为6分钟）。避免对同一动物短期内反复进行TST。
- 环境一致性： 所有动物应在相同环境（光照、噪音、时间点等）下测试，减少环境干扰。
- 操作标准化： 悬挂方式（固定位置、松紧度）、悬挂高度、测试箱规格等需严格一致。
- 悬挂状态确认： 确保小鼠完全悬空，不能攀附或接触任何表面。
- 观察者偏差： 如果手动分析，需对处理组信息设盲，并确保评分标准清晰一致。
- 品系差异： 不同背景的小鼠品系基线不动时间差异显著，选用品系需与研究目的一致，并了解其基线水平。
- 药物影响： 测试前药物处理的时间和剂量需严格依据文献或预实验确定。
总结： 小鼠尾悬挂实验的核心在于通过量化悬吊状态下的“不动时间”来评估行为绝望程度。总不动时间是其最核心、最关键的检测指标，直接反映潜在的抗抑郁效应。通过结合挣扎潜伏期、挣扎总时长、挣扎次数等衍生指标，以及对挣扎与不动行为模式的详细分析，能够更全面地评估小鼠在该应激模型下的行为反应。规范的实验操作、标准化的环境控制、准确的行为识别（尤其是区分“不动”状态）以及严谨的数据分析，是获得可靠结果的关键。该实验是抗抑郁药物筛选和抑郁机制研究中不可或缺的工具。