干性黄斑变性模型（小鼠）

干性年龄相关性黄斑变性（Dry AMD）小鼠模型的核心检测项目

建立可靠的小鼠模型是研究干性AMD病理机制和潜在疗法的基石。以下是一份系统、全面的核心检测项目清单，侧重于评估模型的关键病理特征和疾病进展：

一、 结构变化评估（核心病理特征）

1. 眼底成像与分层评估：

   • 光学相干断层扫描 (OCT)：
     • 视网膜色素上皮层 (RPE) 变化： RPE层不规则、增厚或变薄、连续性中断。
     • 光感受器层变化： 外核层 (ONL) 厚度减少（光感受器细胞丢失）、外节段 (OS) 长度缩短/紊乱。
     • 外层视网膜结构： 评估椭圆体带 (EZ)、嵌合体带 (IZ) 的完整性及信号强度。
     • 玻璃膜疣样沉积物： 检测RPE下或Bruch膜上的高反射灶（drusen样沉积）。
     • 脉络膜变化： 脉络膜厚度测量（可选）。
   • 共聚焦扫描激光检眼镜 (cSLO)：
     • 自身荧光成像： 评估RPE脂褐素积累（自发荧光增强）和RPE细胞损伤/丢失（局灶性低自发荧光）。
     • 红外反射成像： 观察视网膜深层结构、血管和沉积物。
     • 眼底彩色照相： 记录视网膜整体外观、血管变化及可见的沉积物。

2. 组织病理学与形态计量学 (金标准)：

   • 组织切片染色：
     • 苏木精-伊红染色： 评估视网膜各层（特别是ONL、RPE）整体结构、细胞核密度及形态、脉络膜结构。
     • 周期酸-希夫染色 / 淀粉样蛋白染色： 特异性显示玻璃膜疣样沉积物中的碳水化合物成分或淀粉样物质。
     • 脂质染色： 鉴定沉积物和RPE中的脂质成分。
   • 形态计量学分析：
     • 光感受器细胞计数： 定量ONL特定区域的细胞核数量（衡量光感受器变性程度）。
     • ONL厚度测量： 在视网膜不同位置（中央、中周、周边）测量ONL厚度。
     • RPE细胞形态与密度： 评估RPE细胞大小、形状、色素分布、是否有肥大/萎缩及细胞密度变化。
     • 玻璃膜疣样沉积物的量化： 计数沉积物数量，测量其大小、面积占比（在RPE下/Bruch膜区域）。
     • Bruch膜评估： 观察增厚、层状沉积、断裂等结构改变。

二、 功能评估

1. 视网膜电图：

   • 全视野ERG: 评估视网膜整体电生理功能。
     • 暗视视杆反应 (scotopic rod response): 评估视杆通路功能。
     • 暗视标准混合反应 (scotopic standard combined a-/b-wave)： 评估视杆主导的混合反应。
     • 明视视锥反应 (photopic cone response)： 评估视锥通路功能。
     • 明视闪烁光反应 (photopic flicker response)： 评估视锥通路的时间分辨率。
   • 重点分析： 关注b波振幅下降（反映双极细胞功能，间接提示光感受器输入减少）和a波振幅下降（直接反映光感受器功能受损）。

2. 视觉行为学检测：

   • 视动反应： 测量小鼠对移动光栅（不同空间频率、对比度）的头部跟踪反应，量化视觉敏锐度（空间频率阈值）和对比敏感度。干性AMD模型常表现出视觉敏锐度下降。

三、 分子与细胞病理机制探针

1. 氧化应激与损伤标志物：

   • 免疫组化/免疫荧光： 检测视网膜/RPE/脉络膜中氧化损伤标志物（如4-HNE, 8-OHdG, MDA, 硝基酪氨酸）的表达定位和强度。
   • 抗氧化酶活性/基因表达： 分析关键抗氧化酶（SOD, CAT, GPX）的活性和/或其mRNA表达水平（qPCR）。

2. 炎症反应评估：

   • 免疫组化/免疫荧光： 检测视网膜/RPE/脉络膜组织中炎症细胞（如小胶质细胞、巨噬细胞标记物Iba1, CD68）、补体系统组分（C3, C3b, MAC/C5b-9）的表达和定位。
   • 炎症因子/趋化因子表达： 利用qPCR、ELISA或多重免疫分析检测视网膜/RPE/脉络膜匀浆液中促炎因子（IL-1β, IL-6, TNF-α, CCL2, CXCL10等）的水平。

3. 细胞死亡与自噬：

   • 凋亡检测： TUNEL染色标记视网膜（特别是ONL）和RPE中的凋亡细胞核。
   • 自噬标志物： 免疫组化/免疫荧光检测关键自噬相关蛋白（如LC3-II, p62）的表达和定位变化。

4. 脂质代谢与转运：

   • 脂质组学分析： 鉴定视网膜、RPE组织中脂质种类和含量的变化（可选）。
   • 脂代谢相关基因/蛋白表达： qPCR或WB检测ABCA1, ABCG1, APOE等脂质转运蛋白的表达水平。

5. RPE功能标志物：

   • RPE65： RPE视循环关键酶，检测其蛋白表达和分布。
   • 紧密连接蛋白： ZO-1, Occludin等，评估RPE屏障功能完整性。
   • 极性标志物： Bestrophin-1等。

四、 模型验证与对照

• 年龄匹配的野生型对照： 所有检测均需与同周龄、同背景品系的健康野生型小鼠进行比较，以确认模型的特异性变化。
• 时间进程研究： 在多个时间点（如3、6、9、12月龄及以上）进行评估，以捕捉疾病的动态进展过程，这对干性AMD慢性进展的特性尤为重要。
• 模型特异性标志物确认： 对于基因工程模型，需通过基因型鉴定（PCR）和/或目标蛋白表达（WB/IHC）确认模型构建成功。

总结：

对干性AMD小鼠模型的评估必须是多维度、多层次的。结构成像（OCT, SLO）和组织病理学是评估关键病变（RPE异常、光感受器丢失、drusen样沉积）的金标准。功能检测（ERG, 视动反应） 则量化了视力损害的程度。深入的分子与细胞生物学检测（氧化应激、炎症、细胞死亡、脂质代谢、RPE功能） 旨在揭示潜在的病理机制，为靶点发现和干预手段评价提供依据。严谨的实验设计需包含充分的对照组和时间序列分析，以准确捕捉模型模拟人类干性AMD的特征及其进展规律。所有检测均应严格遵守相关动物实验伦理规范。

请注意： 上文旨在提供一份科研导向的通用检测清单。具体研究中，检测项目的选择和优先级需根据研究的特定目标（如机制探索、药物筛选、疗效评价）、所使用的小鼠模型类型（如衰老模型、特定基因敲除/过表达、化学诱导模型）以及可行性（成本、时间、技术条件）进行优化和调整。